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液相色譜等度和梯度洗脫有什麽區別

發布時間:2019-11-26 15:03:07 丨 瀏覽次數:244

相色譜等度和梯度洗脫有什麽區別? 

1、等度洗脫是指實驗過程中(做樣過程)從頭到尾隻用一種流動相。也就是隻用一個泵,輸送同一種流動相。

2、梯度洗脫是指在同一個分析周期中隨著時間的變化按一定程序梯度性地改變洗脫液的比例(濃度配比、成分、離子強度、溶液極性等)或pH,以期將層析柱上不同的組分洗脫出來的方法。從而可以使一個複雜樣品中性質(極性)差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達到良好的分離目的。梯度洗脫一般分為二元高壓梯度,二元低壓梯度和四元低壓梯度;二元高壓梯度需要兩台高壓泵,二元低壓梯度和四元低壓梯度都是隻需 要一台高壓泵和一個比列閥。 

配置特點: 

1. 等度洗脫隻需要配置一台高壓泵,配置相對簡單,成本低;

2. 二元高壓梯度洗脫需要配置兩台高壓泵,一個混合器及連接管理,配置較高,成本高;

3. 二元低壓梯度洗脫需要配置一台高壓泵、一個二元比例閥、一台在線脫氣機、一個混合器(脫氣機和混合器視情況而定,可不選)及連接管路,配置較低,成本較低;

4. 四元低壓梯度洗脫需要配置一台高壓泵、一個四元比例閥、一台在線脫氣機、一個混合器(視情況而定,可不選)及連接管路,配置較高,成本較低。

液相色譜等度和梯度洗脫優缺點: 

1.等度洗脫優點:流速不發生變化,壓力穩定,實驗結果準確、可靠;

缺點:多組分檢測或有雜質幹擾情況下分離度可能會差,而且不容易優化,對於某些複雜樣品分析時間長,峰形差。

2.二元高壓梯度洗脫優點:每台泵的流速都由程序控製,a.多組分檢測或有雜質幹擾情況下提高分離能力,b.縮短某些複雜樣品的分析時間,c.改善峰形,減少拖尾,d.提高柱效,增加檢測靈敏度;

缺點:

a.流速變化得由程序控製,有時會出錯。

b.壓力可能會不穩定。

c.混合時可能會產生氣泡,影響基線噪聲及漂移。

d.高壓混合時可能會產生熱量。

e.對混合器要 求很高,如果混合不好,基線噪聲和漂移會很大。

f.由於流動相比例發生變化,基線可能會漂移。

g.實驗準確度、穩定性沒有等度高。

h.故障率高於等度。

3.二元低壓梯度優點:隻需一台泵一個比例閥,就能達到梯度洗脫效果;

缺點:低壓混合可能會產生氣泡,梯度穩定性和準確度不高。

4.四元低壓梯度優點:隻需一台泵和一個比列閥,就能達到梯度洗脫效果,並且同時可以控製四種流動相。

缺點:低壓混合可能會產生氣泡,需要加在線脫氣機,梯度穩定性和準確度不高,對比列閥要求很高,梯度滯後體積大。

檢測要求:不同物質(所測物質)分離度一定要好,峰形要好,分析時間要短,穩定性、準確度盡量高,實驗成本盡量低等等。

配置建議: 

1.采樣高效液相色譜法實驗時,對儀器的配置一般盡量簡單。儀器配置複雜後,操作就會複雜,穩定性、準確度可能會受影響,故障率就會高,使用成本也會高。在能達到較好的分離度及峰形的情況下能用等度就用等度;

2.同時檢測多種複雜成分,或是有幹擾物的情況下,為達到滿意的峰形、分離度、分析時間,就得使用梯度洗脫方式了。各種成分可以使用不同比例的流動相進行洗脫,如農殘檢測、氨基酸檢測等。要求高的話采用高壓梯度洗脫,要求低的話采用低壓梯度洗脫;

3.流動相種類相對簡單的話采用二元低壓梯度洗脫,相對複雜的話(如洗脫時需要四種不同溶液的流動相)采用四元低壓梯度洗脫。

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