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高效液相色譜流動相的正常要求

發布時間:2020-05-18 11:08:30 丨 瀏覽次數:204

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的,因此要求流動相具備以下特點:

1、純度:流動相必須用HPLC級的試劑,使用前過濾除去其中的顆粒性雜質和其他物質(使用0.45um或更細的膜過濾)。溶劑所含雜質在柱上積累,會影響色譜柱的使用壽命。

2、溶解度: 樣品的溶解度要適宜如果溶解度,如果溶解度欠佳樣品會在柱頭沉澱,不但影響純化分離,還會縮短柱子的使用壽命。

3、粘度要低(應<2cp): 高粘度溶劑會影響溶質的擴散、傳質,降低柱效,還會使柱壓降增加,使分離時間延長。選擇沸點在100℃以下的流動相。

4、樣品易於回收:應選用揮發性溶劑。

5、流動相: PH 采用反相色譜法分離弱酸(3≤pKa≤7)或弱堿(7≤pKa≤8)樣品時,通過調節流動相的pH值,以抑製樣品組分的解離,增加組分在固定相上的保留,並改善峰形的技術稱為反相離子抑製技術。對於弱酸,流動相的pH值越小,組分的k值越大,當pH值遠遠小於弱酸的pKa值時,弱酸主要以分子形式存在;對弱堿,情況相反。分析弱酸樣品時,通常在流動相中加入少量弱酸,常用50mmol/L磷酸鹽緩衝液和1%醋酸溶液;分析弱堿樣品時,通常在流動相中加入少量弱堿,常用50mmol/L磷酸鹽緩衝液和30mmol/L三乙胺溶液。


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